购买国外细胞株应该注意的事项

[2010/11/24]

由于现在国内的细胞库资料不是很充足，而且比较零散，包括建株时的技术层面不一，没有比较严格统一的操作规范，所以在遇到比较重要的实验项目时，一般都比较倾向于购买国外的细胞株，但购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点：

1、细胞株的生物等级，由于有些细胞株及菌株属于管制品，所以从国外购货比较麻烦。

2、在购买国外细胞株时，需交待国外加比较多的干冰（一般在13公斤以上，采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。

3、报关时尽量提供比较充足的证明材料，以免担搁时间而导致干冰挥发完细胞株死亡，甚至于被退回给发货人。

4、如果通过国外细胞株在国内的代理商购买的话，合同中需注明以下一些内容：

a.明确的到货时间，这个时间需注明的是工作日，还是普通日。

b.采用什么样的运输方法？

c.如果属于技术外的因素而细胞株无法培养活，供方需负什么样的责任？

d.细胞株的详细资料，以及细胞株的代数，其中，ATCC的细胞株一般都在几十代,这个需要与国外确认，IST-Banca可与他们的代理商联系索取详细资料！

e.需在合同中注明原装进口，避免相关公司鱼龙浑杂，从国外购买回一株细胞株，经过培养传代后，同时供应给几个人；一般国外进口的细胞株都会有原装的冻存管，而且每一支冻存管上都会有批号，而且每次的批号都不一样。

f.在决定购买细胞株之前，必须仔细阅读他们的培养信息，所谓“细胞株未到，培养基先行一步”。

g.在接到细胞株后，最好要求供应公司的人员现场参与，从而用于确认责任。

h.在培养前，请确认您的二氧化碳培养箱二氧化碳浓度的准确性，国外的细胞株建议用进口的细胞培养瓶，比如：orange，corning, falcon品牌的培养瓶。

i.询问你的代理商或者经销商，接到细胞株后是否需要离心置换出DMSO，因为有些细胞厂家建议不要离心，他们会认为离心而导致的碎片比DMSO产生毒性的害处更大，如果可以离心，转速不要过高，一般都在1000转以下，此处需要注意，因为有的公司会拿这一点来拒绝索赔！

j.培养基的服务，仔细与供应商确认培养基的品牌及份量，以免供应商以些理由来推翻你索赔的理由。

k.在细胞株复苏时，一定要先想好步骤再做，一步一步来做，避免导致操作中的污染，复苏是一个非常重要的步骤，往往容易导致污染，然后为污染所导致的杂质而伤透脑筋。

细胞运输中，还要注意细胞株的反复冻融情况，有的供应商在供应细胞株或者培养基时，特别是需要低温保存的培养基时，通常会出现运输温度与储存温度的差别，而导致培养基或细胞株融掉后又放进低温冰箱进行冻存，然后再快递给我们，特别是血清类制品，如果在接到培养基并解冻后，沉淀和絮状物较多时，那就要怀疑是否是这种情况！

对于所买回来的细胞签别，除了显微镜下的形态学观察，还有就是特异性实验，这也是比较重要的！细胞株有些时候复苏后刚培养的时候，老师们发现从形态上判断似乎不是自己所需要的细胞株，于是我就建议他做细胞属性的特异性实验，ATCC的技术资料最后面附有细胞株的代数，以及细胞株经过了哪些检测，细胞株特异性实验的方法，从而用以确认真正是自己所需要的细胞株！冻存的细胞株，特别是从国外进口的细胞株，应该立即复苏，尽量不要再冻存，反复冻融会导致细胞株复苏后的活性低！第一次接种培养时，应以进口的25平方厘米的培养瓶为佳，现在市面上的主要有orange,cornig,BD(Falcon),其中orange价格比较公道5-6元/个，BD（Falcon)最贵10元左右每个，BD的产品一般用于医院生殖中心实验室人工受精卵的一到三代培养！ATCC的细胞株培养基分为完全培养基（原代培养），次培养基（传代培养基），请大家要注意！

如果细胞运来后，应该马上进行复苏，复苏时，迅速投入37摄氏度水浴中并不断振摇，使之迅速融化，离心应在1000转/分以下，如果太高速会使本来脆弱的细胞产生较多的碎片，培养过程中，甚至会因为碎片而出现黑点(一般都是800r/min,5min)，弃上清液，以去除二甲基亚砜。加入先前配好的培养基，并在50ml培养瓶中进行培养。

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