提取动物组织DNA的方法

[2011/6/14]

  【实验步骤】

  1.组织块解冻,用生理盐水洗去血污,剪取约0.5g组织,剪小放入2.0ml离心管中,用FM-200P研磨45秒;

  2.加入0.45ml TES混匀,再加入50ul SDS(10%),5.0ul蛋白酶K(20mg/ml),充分混匀后,于56°C保温4-6h,每2h摇1次。

  3.放置到室温,加入等体积饱和酚(500ul),颠倒混匀,10000r/m,离心10m,分离水相和有机相,小心吸取上层含核酸的水相,到一个新的1.5ml离心管。

  4.加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒混匀,10000r/m,离心10分钟,取上层转移到新的1.5/2.0ml离心管中;

  5.加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),颠倒混匀,10000r/m,离心10分钟,取上层清液到一个新的1.5/2.0ml离心管;

  6.加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA,观察现象。

  7.12000 r/m,离心10分钟,弃乙醇;

  8.-20°C保存的75%乙醇洗涤,10000 r/m,离心5分钟,去乙醇,55°C干燥DNA;

  9.加入适量TE溶解DNA(具体依DNA的多少而定),-20°C保存备用;

  【注意事项】

  1.抽提每一步用力要柔和,防止机械剪切力对DNA的损伤。

  2.取上层清液时,注意不要吸起中间的蛋白质层。

  3.乙醇漂洗去乙醇时,不要荡起DNA。

  4.离心后,不要晃动离心管,拿管要稳,斜面朝外。