高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷的含量

[2012/2/10]

　　【摘要】目的建立高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷含量的方法。方法采用HypersilODS2柱(4.6mm×250mm×5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);柱温30℃;检测波长230nm。结果芍药苷线性范围0.12～1.08μg，平均回收率=98.78%，RSD=1.35%。结论该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂中白芍的质量控制。

　　【关键词】大黄虫丸芍药苷高效液相色谱法

　　大黄虫丸收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部[1]，主要由熟大黄、土鳖虫、水蛭、桃仁、白芍、黄芩等12味中药组成，功效活血化淤，通经消癥。用于瘀血内停而致腹部肿块、肌肤甲错、经闭不行等，临床疗效确切。但原药为蜜丸，剂型落后，本实验拟对其进行二次开发，原方中药味较多，《中国药典》含量测定只对方中熟大黄中大黄素进行了含量测定，对用量较大的白芍未进行定量，实验采用高效液相色谱法建立了该药中芍药苷的含量测定方法，为进一步开发该制剂打下基础。

　　1器材

　　1.1仪器

　　AngilentHP1100高效液相色谱仪;G1314A紫外检测器;KQ-500DE型超声仪。

　　1.2药品大黄虫丸(广东阳江制药厂有限公司，批号051104，051218，060320);阴性样品(自制)。

　　1.3试剂及材料

　　芍药苷对照品批号(中国药品生物制品检定所，批号0715-200211);高效液相使用乙腈为色谱纯，水为高纯水;其余试剂均为分析纯。

　　2方法

　　2.1含量测定色谱条件色谱柱为AngilentHypersilODS2柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);柱温30℃;流速1.0ml/min;检测波长230nm;进样量10μl。

　　2.2对照品溶液的制备精密称芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作为对照品贮备液。

　　2.3标准曲线的绘制分别精密吸取对照品贮备液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。各精密吸取10μl注入液相色谱仪中，测定，测得峰面积，以对照品进样量为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线，线性范围为0.12～1.08μg，回归方程Y=941.6X 6.2919，r=0.9999。

　　2.4供试品溶液的制备取本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz，40℃)处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，通过氧化铝-活性炭柱(中性氧化铝3g，湿法装柱，上覆层析用活性炭1g，甲醇预洗)，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，水浴浓缩至适量，转移至10ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品液。HPLC图谱见图1。

　　2.5阴性实验按处方比例，制得缺白芍制剂，按供试品项下方法制备阴性样品，进行高效液相测定，证明阴性无干扰。

　　2.6精密度实验取芍药苷对照品溶液(60.8μg/ml)，重复进样5次，测得峰面积分别为580.27545，580.94385，583.23654，582.19873，583.49573，RSD=0.24%,表明仪器精密度良好。

　　2.7稳定性实验取供试品溶液(批号051104)，每隔2h进样测定1次，共进样6次，测得芍药苷的峰面积值分别为345.85455，348.25948，351.16549，347.02654，349.98742，346.14215。RSD=0.62%，表明样品溶液在10h内测定稳定。

　　2.8重复性实验取样品(批号051104)5份，按供试品制备项下分别提取，精制，测定，芍药苷含量分别为1.8026，1.8374，1.8244，1.8149，1.7886(mg/g)，RSD=1.04%，表明实验重复性良好。

　　2.9加样回收率实验取样品(批号051104)5份，分别加入芍药苷对照品适量，按样品制备项下方法制备。结果见表1。表1芍药苷加样回收率实验结果(略)

　　2.10样品测定分别取3批样品，按供试品溶液制备项下制备供试品，分别进样，测定即得。测定结果见表2。表2不同批次样品中芍药苷的含量测定结果(略)

　　《中国药典》2005年版Ⅰ部中白芍药材中芍药苷含量不得少于1.6%，推算得知大黄虫丸中芍药苷含量应不得少于1.44mg/g，因此以上3批样品含量均合格，二次开发制剂中芍药苷的含量应以此为依据。

　　3讨论

　　原方中药味较多，直接使用溶剂提取进行液相测定干扰较大，因此实验考察了供试品制备方法中提取溶剂(甲醇，稀乙醇)、提取方法(回流、超声)、提取时间(20，40，60min)、过柱(上样量、洗脱量)的条件，结果以正文所述方法最好，样品能够达到较好的分离。

　　试比较了3种流动相[2]：①甲醇-水-冰醋酸(49∶50∶1);②乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);③乙腈-水(13∶87)，结果以流动相②分离效果最好，故选择流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)。

　　该含量测定方法简便，快速，重现性好，既可以为进一步开发大黄虫丸奠定基础，亦适合推广应用于含较多药味的中成药中白芍的检测。

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