黄曲霉毒素分析方法汇总

[2012/6/13]

　　一、多功能净化柱+KRC光化学柱后衍生法

　　1 简介

　　多功能净化柱是由多种固相复合填料不仅包括大分子物质，更重要的是含有多种活性亲脂性(非极性)和带电(极性)物质，用来吸附各种酯类，叶黄素，化学物质，碳水化合物和蛋白质等干扰物。多功能净化柱+KRC衍生法就是利用PRIBOLAB公司的Pribofast 226/260多功能净化柱可以将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2很好的分离出来，然后用HPLC/FLD+KRC柱后衍生系统可以有效的测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2含量。

　　2 多功能净化柱特点：

　　2.1 多功能净化柱可以简化样品提取、净化步骤，无需清洗和洗提。

　　2.2 可以实现多种毒素检测，有效降低检测成本;

　　2.3 HPLC+FLD+KRC衍生化，可以有效提高检测灵敏度，实现较低的检测限(黄曲霉毒素B1 0.05ppb);

　　2.4 光化学衍生操作简便，无需使用衍生试剂(通常电化学柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高);

　　2.5 一步法净化，回收率高达90%左右。

　　2.6 广泛适用于各类农产品：谷物、淀粉、动物饲料、食品、坚果、棉籽等。

　　3 多功能净化柱/KRC衍生法操作步骤简介：

　　3.1 提取样品：研磨粉碎、称重25g样品;用乙腈/水(84/16 V/V)混合样品，

　　高速均质 1 分钟。

　　3.2 过滤：将提取的样品定量滤纸过滤，收集滤液;

　　3.3 取4-6ml滤液快速通过多功能净化柱PribofastM226 或Pribofast M260

　　3.4 收集过柱溶液，直接用于HPLC检测，KRC衍生化后直接记录黄曲霉毒素浓度。

　　二、免疫亲和柱+KRC光化学柱后衍生法

　　1 简介

　　Pribofast黄曲霉毒素总量免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的毒素，从而对毒素样品起到非常针对性的纯化作用，然后用HPLC/FLD+KRC柱后衍生系统可以有效的测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2浓度，提高检测的准确性和灵敏度。

　　2 免疫亲和柱/KRC衍生法特点：

　　2.1 特异性很强使得样品净化效果极佳;

　　2.2 使用免疫亲和柱操作架可以使样品净化快速，提高检测效率高

　　2.3 HPLC+FLD+KRC柱后衍生化，有效提高检测灵敏度，实现较低的检测限 (黄曲霉毒素B1 0.05ppb)。

　　2.4 衍生化操作方便，光化学衍生化无需使用衍生试剂(通常电化学柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高)。

　　2.5 回收率高，达到90%以上

　　3 免疫亲和柱法操作步骤简介：

　　3.1 提取样品：研磨、称重50g样品;用甲醇/水(80/20 V/V)混合物将样品

　　高速混匀 1 分钟。

　　3.2 过滤：将提取的样品滤膜过玻璃纤维滤纸，

　　3.3 将回温的免疫亲和柱安装在泵流操作架进行过柱净化：经过Pribofast黄曲霉毒素总量免疫亲和柱(IAC-010-3)活化、淋洗、洗脱三步骤，洗脱下来的溶液可直接用于HPLC检测;

　　3.4 测定：HPLC直接进样，经色谱柱、KRC光化学柱后衍生化后直接记录黄曲霉毒素浓度;

　　三、酶联免疫法检测黄曲霉毒素总量

　　1 采取直接竞争ELISA方法，利用酶标仪测定样品和标准品的样本的吸光值计算得到样品中黄曲霉毒素总量的含量。

　　2 试剂盒检测时间：15分钟+15分钟

　　3 检测限：0.1ppb

　　4 交叉反应率：

　　Aflatoxin B1100%

　　Aflatoxin B280%

　　Aflatoxin G1101%

　　Aflatoxin G2100%

　　AflatoxinM125%

　　关于Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC参数

　　●Pribofast KRC 柱后光化学衍生器波长：254 nm

　　●HPLC-色谱柱：黄曲霉毒素专用色谱柱150 x 4.6 mm; C-18

　　●流动相: 甲醇/水 (45/ 55 v / v)

　　●流量：1.0 mL/min 柱温： 30 °C

　　●进样体积：20μL

　　●荧光检测器：λ-激发波长：365 nm λ-发射波长：440 nm

　　●高效液相色谱仪需要配制：PriboLab公司Pribofast KRC 柱后光化学衍生器，含有1ml反应池，纳米灯管254nm

　　关于黄曲霉毒素专用色谱柱：

　　产品货号产品名称及规格数量

　　IAC-010-3Pribofast, Aflatoxins B1, B2, G1, G2 25 columns/pck 3mL, widebore column

　　黄曲霉素总量免疫亲和柱3ml，25支/盒1盒

　　M226PriboFast®226 Multifunctional cleanup column for Aflatoxin and zearalenone

　　霉菌毒素多功能净化柱，用于黄曲霉毒素玉米赤霉烯酮检测25支/盒1盒

　　PriboFast® 260PriboFast® 260 Multifunctional cleanup column for Aflatoxin and zearalenone

　　霉菌毒素多功能净化柱，用于黄曲霉毒素玉米赤霉烯酮检测25支/盒1盒

　　PR K010-96Pribofast ELISA Kit (96-well plate/stripes) for detection of Aflatoxin B1, B2, G1, G2 in food and feed samples

　　黄曲霉素总量ELISA试剂盒包，96孔1盒

　　STD#1081Standard, Solution of 4 different aflatoxins in acetonitrile B1, G1

　　黄曲霉素B1B2G1G2 混合标样。1ml装，4度阴暗保存

　　也可提供黄曲霉毒素B1B2G1G2 四种单独的固体装标准品。1盒

　　KRC-25Photochemical Reactor for Enhanced Detection Aflatoxin B1, B2, G1, G2; Pribofast KRC-25 230V 50 HzUVE 254 nm lamp

　　Pribofast KRC 光化学柱后衍生反应系统，254nm纳米紫外灯1套

　　ODS-150HPLC-Column for Aflatoxin Analysis, C18 150 x 4.6 mm 黄曲霉毒素专用液相色谱柱1根

　　泵流操作架/免疫亲和柱操作架,用于免疫亲和柱样品净化操作

　　(含气泵转换头等配件，多用连接头是选配)1套

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