离心机提取乳酸脱氢酶及辅酶方法说明

[2012/8/27]

　　台式离心机可以应用于乳酸脱氢酶及辅酶的提取。乳酸脱氢酶，是一种不需氧脱氢酶，以辅酶I(NAD﹢)为辅酶，催化乳酸与丙酮酸的可逆的氧化还原反应。肌肉中含有大量的乳酸脱氢酶，在乳酸含量较高及氧气充足情况下，催化乳酸生成丙酮酸，体外实验中，为观察方便，在隔绝空气后以甲烯蓝作为受氢体，井用固定反应中生成的丙酮酸，而使乳酸全部转化为丙酮酸。今天我们对如何通过台式离心机提取乳酸脱氢酶及辅酶I进行介绍。

　　通过离心提取乳酸脱氢酶及辅酶用到的材料、试剂及设备有：(1)动物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸锂溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳钵;(7)台式离心机等

　　具体操作方法：

　　1.辅酶I(NAD﹢)的制备：取动物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分钟(抑制酶的活力，防止将辅酶I破坏)，取出冷却、剪碎，加入少许9g/LNaCl溶液及细沙用乳钵研磨成糊状，再加9g/LNaCl溶液8ml混匀，利用台式离心机进行离心沉淀，收集上清液，储冰箱备用。

　　2.乳酸脱氢酶酶蛋白的提取：取动物后腿肌肉2g置乳钵中，加入少许9g/LNaCl溶液及细砂，仔细研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混匀，用双层纱布过滤，滤液加活性炭0.5g振摇数分钟后放置半小时，并时常摇动，然后通过台式离心机离心分离，取上清液备用。

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