饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法

[2012/9/21]

　　1简介

　　饲料中黄霉素检验的高效液相色谱法测定方法。

　　本标准适用于饲料中黄霉素的测定，使用仪器501高效液相色谱仪。

　　2规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T14699.1饲料采样

　　3试样制备

　　按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径

　　的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。

　　4原理

　　饲料中黄霉素经50%的甲醇提取后，用pH6.0磷酸盐缓冲液稀释至所需浓度，反相色谱柱进行分离，UV501紫外检测器检测，外标法定量。

　　5试剂和溶液

　　5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。

　　5.2黄霉素对照品：纯度100%。

　　5.3黄霉素储备液：精密称取黄霉素对照品适量，用甲醇配制成1mg/mL，作为标准储备溶(贮存4℃冰箱保存10天)。

　　5.4黄霉素标准工作液：量取适量黄霉素储备液，用pH6.0磷酸盐缓冲液稀释成浓度为0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50μg/mL的系列标准工作液(4℃保存7天)。

　　5.5甲醇：色谱纯。

　　5.6乙腈：色谱纯。

　　5.7甲酸铵。

　　5.8磷酸。

　　5.9pH6.0磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使溶解成1000mL，即得。

　　6仪器设备

　　6.1501高效液相色谱仪(配紫外检测器)。

　　6.2饲料粉碎机。

　　6.3分析天平，感量0.0001g，0.001g。

　　7测定步骤

　　7.1试样提取

　　称取粉碎后的饲料样品5g(精确至0.001g)，加入50.0mL50%甲醇溶液提取后，过滤，滤

　　液用磷酸盐缓冲液pH6.0稀释至所需的适当浓度，经0.45μm滤膜过滤后供高效液相色谱仪分析。

　　7.2色谱条件

　　色谱柱：(4.6×150mm，5μm)或性能相当的色谱柱。

　　流速：0.7mL/min。

　　检测波长：258nm。

　　进样量：20μL。

　　流动相：乙腈:0.2%甲酸铵水溶液=45:55(用10%磷酸调节至pH4.9)

　　7.3上机测定

　　取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。

　　8结果计算

　　按照下式计算试样中药物的含量：

　　X=A×Cs×V×1000/As×m×1000×n

　　式中：

　　X——试样中药物的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　A——应的色谱峰面积响应值;

　　As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值;

　　V——定容体积，单位为毫升(mL);

　　Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　m——试样质量，单位为克(g);

　　n——稀释倍数。

　　平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。

　　9检测方法灵敏度、准确度、精密度

　　9.1灵敏度

　　本方法的检测限为0.5mg/kg。

　　9.2准确度

　　本方法添加浓度1.0mg/kg，回收率为80%～120%。9.3

　　精密度

　　本方法的批内变异系数CV≤10%，批间变异系数CV≤15%。

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