亲和色谱的载体选择

[2012/11/5]

　　用于亲和色谱的理想载体应具有下列特性：⑴不溶性：不溶于水;⑵渗透性：疏松网状结构，容许大分子自由通过;⑶有一定硬度，最好为均一的珠状;⑷具有大量可供反应的化学基团，能与大量配基共价连接;⑸非特异性吸附能力极低;⑹能抗微生物和酶的侵蚀;⑺有较好的化学稳定性;⑻亲水性。选择配基根据对纯化大分子的特异性的全面认识。

　　选择也的配基有两条标准：第一是蛋白质和配基之间必须有强的亲和力，解离常数在5mM以上不是好配基;相反亲和力太高也是有害的，因为在解离蛋白质──配基复合物时所需的条件就要强烈，这样可能使蛋白质变性。例如用抗生物素蛋白作配基纯化含生物素的羧化酶时，生物素──抗生物素蛋白复合物的解离常数达10-15M，解离时需要pH1.5，6M盐酸胍，在这种条件中。羧化酶大多数已经变性。选择配基的第二个标准是，配基必须具有适当的化学基团，这种基团不参与配基与蛋白质之间特异结合，但可用于活化和载体相连接，同时又不影响配基与蛋白质之间的亲和力。

　　琼脂糖凝胶亲水性强，理化性质稳定(商品名：Sepharose);聚丙烯酰胺凝胶理化性质稳定，耐有机溶剂及去污剂，抗微生物能力强，特别适应用配基与提取物亲和力比较弱的物质。葡聚糖凝胶：有良好的化学及物理性质，孔经小。纤维素非特易吸附严重，廉价，易得。

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