适用于食品卫生微生物学检验大肠菌群测定—国家标准

[2012/11/13]

  食品卫生微生物学检验

  大 肠 菌 群测定

  范围

  本标准规定了食品中大肠菌群的侧定方法。

  本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。

  2 规范性引用文件

  下 列 文 件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有

  的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究

  是否可使用这些文件的最新版本‘凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准,

  GB /T 4 789.2 8-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

  术语和定义

  下 列 术 语和定义适用于本标准。

  3. 1

  大肠 菌 群 Colijormb acteria

  一 群 能 发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪

  便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。

  食 品 中 大肠菌群数系以100m L(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

  4 设备和材料

  冰箱:OC-4C。

  恒温培养箱:36℃士1C ,

  恒温水浴锅:46℃士1C。

  显微镜:lox一loo x。

  均质器或灭菌乳钵。

  架盘药物天平:0g -500g >精确至0.5 g ,

  灭菌吸管1m l,(具0.0 1m L刻度),10m l,(具0.1 m l,刻度)。

  灭菌锥形瓶:500 mL,

  灭菌玻璃珠:直径约5 mm,

  灭菌培养皿:直径90 mm,

  灭 菌试管:16m mX 160m m,

  灭菌刀、剪子、镊子等。

  5 培养签和试荆

  5.1 乳搪胆盐发酵管:按GB/T 4789. 28-2003中4.9规定。

  5.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB/T 4789. 28-2003中4.25规定。

  5.3 乳搪发酵管:按GB/T 4789. 28-2003中4.10规定。

  GB/T 4789. 3-2003

  5.4 EC肉汤:按GB/T 4789.2 8-2003中4.11规定。

  5.5 磷酸盐缓冲液:按GB/T 4789. 28-2003中3.22规定。

  5.6 0.85%灭菌生理盐水。

  5.7 革兰氏染色液:按GB/T 4789. 28-2003中2.2规定。

  6 检验程序

  大肠菌群检验程序见图1,

  7 操作步驭

  7.1 检样稀释

  7.1.1 以无菌操作将检样25 g(mL)放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内

  (瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1,10的均匀稀释液。固体检样

  最好用均质器,以8 000 r/min-10 000 r/min的速度处理1 min,做成1,10的均匀稀释液。

  7.1.2 用1 mL灭菌吸管吸取1,10稀释液1 mL,注人含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管

  内,振摇试管混匀,做成1,100的稀释液。

  7.1.3 另取1 mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1 mL灭

  菌吸管。

  7.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种三管。

  7.2 乳箱发酵试验

  将 待 检 样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1m L以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1m L及

  1 mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管,置36℃ 士11C温箱内,培养24 h士2h,如

  所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。

  7.3 分离培养

  将 产 气 的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36℃士10C温箱内,培养18h --24h ,然后取

  出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。

  7.4 证实试验

  在 上 述 平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1个一2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置

  36℃士1℃培养箱内培养24 h士2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,

  即可报告为大肠菌群阳性。

  7.5 报告

  根 据 证 实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每l00mL(g)大肠菌群的MPN值。

  8 粪大肠菌群(Faecal coliform)

  8.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2)转种于EC肉汤管内,置44.5℃士0.2 0C

  水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24 h士2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产

  气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置培养

  18 h-24 h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。

  8.2 结果报告

  根 据 证 实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100m L(g)粪大肠菌群的MPN值(见

  表1),