干细胞的原代提取

[2013/7/2]

　　胚胎干细胞

　　免疫学法是较为常用的分离方法，它可选择性地杀死囊胚外层的滋养层细胞，而仅保留ICM。它的原理是先将胚泡与抗小鼠的血清共同孵化一段时间后，然后加入补体，在补体的作用下，外层的滋养细胞发生溶解，而ICM则不受影响。

　　神经干细胞

　　目前，神经干细胞的分离方法主要有三种：无血清培养基自然筛选法、流式细胞术分选法、免疫磁珠分选法。

　　无血清培养基自然筛选法是迄今应用最为广泛，也是最简单和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培养基使成熟的神经细胞无法较长时间地成活，而分离筛选出能够在该培养条件下存活并繁殖的神经干细胞群体。

　　步骤： (1)取胎脑;

　　(2)用吸管吹吸使细胞分散均匀;

　　(3)加小鼠神经干完全培养基培养。

　　脂肪间质干细胞

　　分离培养脂肪干细胞主要是通过胶原酶进行消化，获得细胞悬液。分离培养大鼠脂肪间质干细胞的大致步骤如下：

　　(1)取腹股沟处脂肪，充分剪碎;

　　(2)加入胶原酶，将其转移至离心管中进行消化30分钟，加入培养基终止消化;

　　(3)离心，大鼠脂肪间质干细胞培养基重悬，接种至培养瓶中。

　　骨髓间质干细胞

　　目前常用的分离MSC的方法有密度梯度离心法和全骨髓贴壁法。全骨髓贴壁法的原理是根据间质干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化与扩增间质干细胞的目的。

　　步骤 : (1)取大鼠股骨和胫骨，以完全培养基冲洗股骨和胫骨骨髓，转移至离心管中，离心，去上清;

　　(2)大鼠骨髓间质干细胞培养基重悬，接种培养;

　　(3)原代培养36h全液量换液，去除未贴壁的造血细胞，以后每3天换液一次，直到细胞80-90融合传代。

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