柱层析分离实验操作步骤

[2013/7/23]

　　实验操作步骤如下:

　　1.确定干燥、不含溶剂的待分离粗产品的重量。

　　2.用薄层色谱(TLC)选取溶剂体系，使Rf的值处于0.2～0.3之间。

　　3.确定用于样品上柱的方法。可有三种选择：净试样法，溶液法(湿法)或硅胶吸附法(干法);对于液体和固体，较为普遍的方法是溶液法(湿法)上样，即将样品溶于溶剂中，然后将溶液加入分离柱。

　　4.确定合适的硅胶和化合物的比例。对于简单的分离，通常要求两者的比例为30~50：1(重量比);但对比较困难的分离，需要的比例高达120：1。

　　5.选取合适的分离柱——硅胶量决定了分离柱的尺寸，一般选用短而粗的加压柱。

　　6.选取合适的收集用容器——将硅胶体积除以4，然后选取能装下这个体积的容器就可(20L的硅胶对应于5 L的组分)。

　　7.装柱。戴好活性炭口罩，在(落地)通风橱中装好分离柱，干法和湿法装柱均可，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢)，一定要均匀(不然样品就会从一侧斜着下来)。

　　8.加样。用少量的溶剂溶解待分离粗品，加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2～4cm)，再加压，这样避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行。

　　9.样品的收集。一边收集样品，一边进行色谱分析(TLC、LC-MS或HPLC)跟踪柱子的分离进程。

　　10.将所需纯度的流出组分合并后用旋转蒸发仪进行浓缩。

　　11.当完全除去溶剂后，进行分析(LC-MS、HPLC、或NMR等)，称重。

　　12.按相关规程进行清场处理。

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