氨基酸分离纯化的办法

[2013/7/30]

  氨基酸盐析常用的中式盐,主要有-硫-酸-铵、-硫-酸-镁、-硫-酸-钠、食盐、磷酸钠等。因为这个在盐析前血清要加等量机体机能盐水稀释,使氨基酸含量在2.5-3.0百分之百。这个之外也可用葡糖凝胶G-25或G-50过柱的方法除盐,所用的时间就比较短。氨基酸液体浓度:氨基酸液体浓度高时,欲离合的氨基酸每常掺杂着其它氨基酸地一块儿沉淀出来(共沉现象)。盐析时若溶液pH在氨基酸等电点则效果更好。普通温度低氨基酸溶介度减低。

  影响盐析的因素有:温度:除对温度敏锐的氨基酸在低温5度操作外这时需要使用生化培养箱,普通可在室温中施行。pH值:大部分数氨基酸在等电点时在浓盐溶液中的溶介度最低。

  氨基酸在用盐析沉淀离合后,需将氨基酸中的盐去掉除掉,常用的方法是透析,即把氨基酸溶液装入秀析袋内常用的是玻璃纸,施行透析,并不断的改变,因透析所需时间较长,所以最好在低温中施行。因为各种氨基酸分子颗粒体积、亲水程度不一样,故盐析所需的盐液体浓度也不同,因为这个调节混合氨基酸溶液中的中式盐液体浓度可使各种氨基酸分段沉淀。但有的氨基酸如鲜红蛋白、肌红蛋白、清蛋白在较高的温度20度比0度时溶解度低,培养箱更容易盐析。

  中式盐对氨基酸的溶解度有显著影响,普通在低盐液体浓度下随着盐液体浓度升高,氨基酸的溶解度增加,此称盐溶;当盐液体浓度接着升高时,氨基酸的溶解度不一样程度减退并先后析出,这种现象称盐析,将数量多的盐加到氨基酸溶液中,高液体浓度的盐离子如-硫-酸-铵的SO4和NH4有很强的水合力,可夺氨基酸分子的水合层使之失水,于是氨基酸胶粒凝固并沉淀析出。那里面应用最多的-硫-酸-铵,它的长处是温度系数小而溶解度大20度时达到最高限度溶液为4.1M,即767克/升;0度时达到最高限度溶解度为3.9M,即676克/升),在这一溶解度范围内,很多氨基酸和酶都可以盐析出来;额外-硫-酸---铵分段盐析效果也比其它盐好,不易引动氨基酸改变性别。-硫-酸-铵溶液的pH常在4.5-5.5之间,当用其它pH值施行盐析时,需用-硫-酸-或氨水调节。