免疫组化实验操作

[2013/8/1]

  免疫组化实验操作

  60℃烤片2小时

  脱蜡。二甲苯脱蜡15分钟,三次

  水化。依次经过无水乙醇、95%、90%、80%、70%,各2分钟,蒸馏水(或自来水)5分钟

  PBS洗5分钟,三次

  3%双氧水封闭20分钟,PBS洗5分钟,三次

  抗原修复。枸橼酸缓冲液(约92-95℃)煮沸(沸水浴)修复15分钟,自然凉至室温。PBS洗5分钟,三次

  正常山羊血清封闭,37℃15-20分钟

  一抗孵育,4℃过夜.

  复温20分钟,PBS洗5分钟,三次

  二抗孵育,37℃20分钟(二抗为生物素标记的羊抗兔IgG),PBS洗5分钟,三次

  三抗孵育,37℃20分钟(三抗为辣根酶标记的链酶亲和素),PBS洗5分钟,三次

  DAB显色,镜下观察结果,适时终止

  苏木素复染5分钟,自来水冲洗片刻,75%的盐酸酒精溶液分化30秒,自来水冲洗5分钟蓝化

  脱水。依次经过70%、80%、90%、95%、无水乙醇,各2分钟,二甲苯15分钟,三次

  封片,中性树胶封片