还原糖含量的测定实验步骤

[2013/9/25]

  1.标准曲线的制作:

  在一系列刻度试管中,分别加入200μg/mL 标准葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL,再顺序加入蒸馏水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL,配成浓度分别为0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每试管加入铜试剂2mL,混匀后沸水浴中加热10min,立即冷却,再加入2mL 砷钼酸试剂,振荡两分钟后稀释到20mL,用分光光度计在620nm 波长下比色,测其光密度OD620nm(做一式两份)。以糖浓度微克数为横坐标,光密度OD620nm 为纵坐标,绘制标准曲线。

  2.植物样品中还原糖的提取:

  将样品洗净,吸干其表面水分,切碎混匀,称取1g 放入研钵中,加入约0.5g 石英砂,磨成匀浆,加水将样品由玻璃漏斗冲入100mL 容量瓶中,加水达70~80mL,摇匀后置于80℃恒温水浴上浸提0.5h。

  待上述样品冷却后,沉淀蛋白质,加入5%硫酸锌5mL,再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL,以沉淀蛋白质。振荡后静置,至上层出现清液后再加一滴Ba(OH)2,直至无白色沉淀时,向容量瓶加水至刻度。

  3.还原糖含量的测定:

  过滤上述已定容的样品液,取5mL 滤液,再定容到100mL(此步视样品的含糖量而定)。取已稀释的溶液2mL,与标准葡萄糖显色法相同:加铜试剂2mL,煮沸10min,加砷钼酸试剂 2mL,振荡2mL,定容到15ml,620nm 波长下比色,记下光密度OD620nm(至少重复两次)。