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生化与分子生物学常用缓冲液的配制
[2013/10/8]
常用缓冲液：
TE
pH7.4
10mmol/LTrisCl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTrisCl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STE(亦称TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100
TNT
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20
电泳缓冲液
Tris-乙酸(TAE)：50×浓贮存液(每升)：242gTri碱
5 7.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸(TPE)：10×浓贮存液(每升)：108gTri碱
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸(TBE)：5×浓贮存液(每升)：54gTri碱
27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
碱性缓冲液：1×使用液(每升)：5ml10mol/LaOH
2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸：5×浓贮存液(每升)：15.1gTri碱
94g甘氨酸(电泳级)(pH8.3)
50ml10%SDS(电泳级)
2×SD凝胶加样缓冲液
100mmol/LTris?HCl(pH6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)
4%SDS(电泳级)
0.2%溴酚蓝
20%甘油
30%丙烯酰胺：
将29g丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。
10mol/L乙酸铵：
把770g乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
1mol/LCaCl2：
在200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
2.5mol/LCaCl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT)：
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?H2O)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。
溴化乙锭(10mg/ml)：
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
1mol/LMgCl2：
在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。
酚：氯仿：
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液层，保存于4℃。
磷酸缓冲盐溶液：
在800ml蒸馏水中溶解8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，高压蒸汽灭菌20min。保存于室温。
乙酸钾溶液(用于碱裂解)：
在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度5mol/L的溶液。
3mol/L乙酸钠(pH5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
1mol/LTris：
在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入浓HCl调节pH至所需值。
pHHCl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
Tri缓冲盐溶液(T)：
在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。
5mmol/LNH4Ac溶液：
秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。
10mg/mlA(小牛血清白蛋白)溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。
10%十二烷基硫酸钠(SDS)：
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。
TE
pH7.4
10mmol/LTrisCl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTrisCl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STE(亦称TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100
TNT
10mmol/LTris?Cl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20
电泳缓冲液
Tris-乙酸(TAE)：50×浓贮存液(每升)：242gTri碱
5 7.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸(TPE)：10×浓贮存液(每升)：108gTri碱
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸(TBE)：5×浓贮存液(每升)：54gTri碱
27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
碱性缓冲液：1×使用液(每升)：5ml10mol/LaOH
2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸：5×浓贮存液(每升)：15.1gTri碱
94g甘氨酸(电泳级)(pH8.3)
50ml10%SDS(电泳级)
2×SD凝胶加样缓冲液
100mmol/LTris?HCl(pH6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)
4%SDS(电泳级)
0.2%溴酚蓝
20%甘油
30%丙烯酰胺：
将29g丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。
10mol/L乙酸铵：
把770g乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
1mol/LCaCl2：
在200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
2.5mol/LCaCl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT)：
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?H2O)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。
溴化乙锭(10mg/ml)：
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
1mol/LMgCl2：
在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。
酚：氯仿：
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液层，保存于4℃。
磷酸缓冲盐溶液：
在800ml蒸馏水中溶解8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，高压蒸汽灭菌20min。保存于室温。
乙酸钾溶液(用于碱裂解)：
在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度5mol/L的溶液。
3mol/L乙酸钠(pH5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
1mol/LTris：
在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入浓HCl调节pH至所需值。
pHHCl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
Tri缓冲盐溶液(T)：
在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。
5mmol/LNH4Ac溶液：
秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。
10mg/mlA(小牛血清白蛋白)溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。
10%十二烷基硫酸钠(SDS)：
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。
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