细胞培养常见问题分析

[2013/10/21]

　　1. 何时须更换培养基?

　　视细胞生长密度和生长状态而定，有的细胞消耗培养液较快，细胞有60-70%的汇合度就可以消化传代，简单的换液不合适，因为细胞有可能处于缺营养的状态;另外一种需要换液情况就是细胞状态欠佳的时候，可以用PBS先洗涤一下，再更换完全培养液，去除那些死细胞和漂浮的状态不好的细胞，可以调节一下细胞状态。

　　2. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?

　　不建议。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，而且经过一定时间驯化，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞都有可能出现不适应，表现出生长缓慢，颗粒增多，有死细胞出现，造成细胞无法存活。也有些细胞在更换培养液后也能正常的生长，细胞状态也能维持，但是问题往往出现在冻存后期的复苏过程，有可能细胞没法复苏，所以不建议随便更换培养基。

　　3. 可否使用与原先培养条件不同之血清种类?

　　不建议。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。按照道理胎牛血清比小牛血清要好，但是在实际操作中未必如此，更换好的血清细胞同样会有可能出现生长状态欠佳，另外就是，在细胞状态欠佳的状态，更换好的血清有可能会适得其反，加速细胞死亡，所以不建议随便更换血清。

　　4. 何谓FBS, FCS, CS, HS ?

　　FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

　　5. 细胞之接种密度为何?

　　依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长或状态欠佳之重要原因。

　　6. 悬浮性细胞应如何继代处理?

　　一般情况下可以加入新鲜培养基于原培养瓶中，稀释细胞浓度即可，但不可以持续这样操作，因为细胞的代谢物一直累积在培养液中，随着时间的延长，浓度越来越高，会影响细胞的生长，所以建议稀释细胞浓度传代几次后要做一次离心处理，去除培养液中长期累积的代谢物，这样有利于保持细胞的状态。

　　7. 冷冻管应如何解冻?

　　取出冷冻管后，须立即放入37-40 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

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