常用镜检法的调置

[2013/11/26]

　　随着近代光学技术的发展以及微电子、计算机技术的融合，赋予光学显微镜以新的生命力。在掌握必要的显微镜及其各种镜检法的理论知识基础上，精确进行调试、校准和定期维护，对于保证显微镜技术的有效利用和观测质量尤为重要。对于镜检法操作过程中常易疏漏的调制环节我们来作为重点讨论一下。

　　1 明场(bright field, BF)

　　定期进行聚光镜中心调整，实时进行聚光镜与物镜NA的对应数值调设。清洁盖玻片、载玻片，确保没有手印、沾染物。使用油镜时，调焦或移动视野要慢些以维持浸油形成的表面张力保证对焦和孔镜角稳定，兼做荧光观察的物镜最好统一用无荧光油。

　　2 暗场(dark field, DF)

　　暗场镜检首先是利用暗场聚光镜的环状裂隙和凹面镜制造有序的斜射光，因此必须调整好光轴对中。要清洁物镜的前透镜等光学器件和标本片，载玻片不能太厚，否则聚光镜的焦点落到被检物体焦面以外。

　　3 相差(phase contrast, PH)

　　镜检前，要用调中镜(centering telescope，CT)逐一检查物镜的相板与所对应的聚光镜相差环是否达到光学共轭，即聚光镜相差环环状光阑像的透明圈与物镜相板共轭面完全吻合，才能达到理想的相差效果。一般情况下，聚光镜的孔径光阑应适当开大或设置在标定PH位。切片控制在5～10μm厚度，封片剂要均匀。

　　4 DIC相差(differential interference contrast, DIC)

　　标本或器皿要洁净无尘，必须事先调整好起偏镜、检偏镜和DIC棱镜的设置，用CT镜检测出现清晰的干涉条纹。但兼做荧光观察时，要把DIC器件移出光路，以避免较强的激发光损伤DIC器件的光学镀膜。塑料器皿最好选择Hoffman调制相差(Hoffman modulationcontrast，HMC)。

　　5 荧光(fluorescence，FL)

　　需遵循说明书熟练掌握荧光光源的灯丝对中方法，当荧光照明不均或亮度不佳时进行检查调整，特别是在移动了荧光显微镜位置、过度振动、误触碰了聚光和对中调节螺杆等情形后。在研究室荧光装置最好在视场光阑的基础上加配置孔径光阑调节，并定期检查荧光激发光路中心，根据标本情况调节孔径光阑和光路聚焦。汞灯在开启约5分钟后达到最佳弧光照明亮度，一旦关闭必须等15～20分钟后方可再次开启(待汞蒸汽复至常态)。
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