胶回收常见问题及对策

[2014/12/31]

　　1. 没有回收到DNA片段

　　如在洗脱后，发现洗脱液中没有DNA 片段，请检查是否按瓶身标签，在洗涤液中加入了无水乙醇。

　　2. 提取率低

　　1) 融胶液为酸性缓冲液，如融胶后，其pH 值升高将影响提取得率。请加入0.1 倍体积的3M 乙酸钾(pH5.0)。

　　2) 长时间使用后没有更换的电泳缓冲液，其pH 值较高，将影响DNA 的吸附。请更换新的电泳缓冲液后，再进行电泳，然后切胶。

　　3) 回收片断大小影响回收效率(见下图);

　　4) 在洗脱前，将洗脱液于30～60℃温浴，可提高提取效率适当延长洗脱时间可增加回收效率。

　　5) 正确估计胶大小，确保加入足够量的Binding Buffer;使胶完全融解;

　　6) 提高Binding Buffer用量可提高小片断DNA回收效率.对于<100bp的DNA片断,可加入6倍体积的Binding Buffer;

　　3. 吸光度测量结果问题

　　吸光度测量的是未知样品与调零标准之间的相对吸光度，所以请用与洗脱液体相同的液体，对测量样品进行稀释和调零。

　　4.如何计算提取率

　　1) 由于回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率。

　　2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比。

　　3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。

上一篇：什么是超声波检测法

下一篇：常规组织培养法