几种常用溶液的配制方法

[2015/1/9]

　　1、PBS:

　　取PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。

　　2、TBS：

　　2.1 Tris缓冲液配方：(0.5 M pH7.6)

　　Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g

　　1N HCL 约420ml

　　双蒸水加至1000ml

　　Tris缓冲液配制方法：

　　先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris，加入HCl后，用HCl(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。

　　2.2 TBS配方：

　　Tris-HCI缓冲液(0.5M pH7.6) 100ml

　　NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)

　　双蒸水加至1000ml

　　TBS配制方法：

　　先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。

　　3、枸橼酸盐缓冲液(Citrate buffer)：

　　3.1 储存液：

　　A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸馏水中。

　　B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸馏水中。

　　3.2 工作液：

　　取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0±0.1

　　4、胰酶(Trypsin)：

　　4.1 胰蛋白酶消化液：

　　常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释)，则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%(1:10稀释)至0.25%(1:1稀释)。

　　4.2 胰蛋白酶：

　　取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

　　5、胃酶(Pepsin)：

　　4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。

　　6、DAB：

　　6.1 DAB Kit：

　　使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。

　　6.1 DAB：

　　6mgDAB溶于10mlTBS(0.05M pH7.6)，再加入0.1ml浓度为3%的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。

　　7、AEC：

　　4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2)，然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。

　　8、RIPA：

　　1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。

　　8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液(用量为10ml/ml)

　　8.2 Aprotinin(Sigma产品，用量为30ml/ml)

　　8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液

　　(用量为10ml/ml)

　　9、Blotto A：

　　常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。

　　10、Blotto B：

　　与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。
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