蛋白质的定量测定实验

[2015/1/16]

　　蛋白质定量是生物化学、食品检验和其它生命学科最常涉及的分析内容，是临床诊断的重要指标，也是许多生物制品、药物、食品质量检测的重要指标。生化实验中，在对生化药品，特别是蛋白质、酶、某些多肽或蛋白质激素的分离纯化时，对蛋白质进行准确可靠的定量分析是非常重要的。

　　然而蛋白质的种类很多，结构不均一，分子量又相差很大，功能各异，这给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法带来了很大的困难。目前测定蛋白质含量的方法有很多种，不同的方法各有其特点。

　　紫外分光光度法是根据蛋白质的物理性质来对蛋白质进行定量的;而凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry法、BCA法、胶体金法测试根据蛋白质的化学性质来实现对蛋白质进行定量的;根据蛋白质的染色性质的不同，又建立了考马氏亮蓝染色法和银染法;此外还有人在这些蛋白质定量方法的基础上建立了荧光法。

　　由于每种方法都有其自身的特点和局限性，因而需要在了解各种方法的基础上根据不同情况选用恰当的蛋白质测定方法，以满足不同的要求。例如凯氏定氮法结果最精确，但操作复杂，用于大批量样品的测试则不太合格;双缩脲法操作简单，线性关系好，但灵敏度差，样品需要量大，测量范围窄，因此在科研上的应用受到限制;而酚试剂法弥补了它的缺点，它结合了双缩脲法中铜盐反应与Folin-ciocalteau试剂反应的特点，因而在科研中被广泛采用，但是它的干扰因素较多;考马氏亮兰染色法因其灵敏而简便开始重新受到关注;BCA法以其试剂稳定，抗干扰能力较强，结果稳定，灵敏度高而受到欢迎;而胶体金法具有较高的灵敏度，可达到毫微克水平，用于微量蛋白的测定。

附：常用的测定蛋白质含量方法的比较

方法	测定范围（μg/ml）	不同种类蛋白的差异	最大吸收波长（nm）	特点
凯氏定氮法		小		标准方法，准确，操作麻烦，费时，灵敏度低，适用于标准的测定
紫外分光光度法	100—1000	大	280 205	灵敏，快速，不消耗样品，核酸类物质有影响
双缩脲法	1000—10000	小	540	重复性、线性关系好，灵敏度低，测定范围窄，样品需要量大
Folin-酚试剂法	20—500	大	750	灵敏，费时较长，干扰物质多
考马氏亮蓝G-250	50—500	大	595	灵敏度高，稳定，误差较大，颜色会转移
BCA	50—500	大	562	灵敏度高，稳定，干扰因素少，费时较长

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