微量免疫电泳实验

[2015/9/10]

　　实验方法原理：免疫电泳法（immunoelectrophoresis）是把蛋白质电泳分离技术（琼脂电泳）和免疫学检测技术（双向扩散）结合起来的检测法。此法在微量的基础上具有分辨率高，灵敏度高，时间短等优点，是很理想的分离和鉴定蛋白质混合物的方法。用于抗原、抗体定性及纯度的测定。在临床诊断方面也有应用价值。

　　实验材料：人IgG 兔抗人IgG

　　试剂、试剂盒：琼脂，巴比妥钠，牛血清白蛋白

　　仪器、耗材：电泳仪，水平电泳槽，打孔器，微量加样器，牙签，载玻片，恒温水浴，小刀

　　实验步骤

　　1.琼脂板的铺制：铺好琼脂板，打孔划槽，电泳时不要把槽中的琼脂挑出来（槽的两纵向平行边先不划开）。

　　2.加样：使琼脂板的上孔里充满抗原溶液，下孔里充满着指示蛋白。

　　3.电泳：同上操作方法，调电流强度为2～4mA/cm。当指示蛋白质到达滤纸的边缘时就可以停止电泳。一般需要40～60min。

　　4. 扩散：电泳结束后，从琼脂板中间的槽里用牙签挑出琼脂凝胶，并加入免疫血清。将琼脂板置温盒内（或培养皿中），盖好盖子放置一夜。次日可以观察到凝胶内出现的沉淀线。一般情况下每一沉淀线即代表一种抗原成分。根据沉淀的数量、位置可以判断抗原的纯度以及抗原蛋白质的种类。微量免疫电泳常用于分析样品的血清成分。

　　5. 观察：免疫电泳的图谱可以直接观察到抗原抗体沉淀线，也可以用0.1%的氨基黑染色后观察。如果需要保存可以拍照。

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