无菌接种操作步奏
2016/7/15

无菌操作环节

1)接种室应保持清洁,用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁,定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前,均应用紫外灯灭菌。定期对接种室作无菌程度的检查。

2)进入接种室前,应先做好个人卫生工作,在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用。不准穿到其它地方去,并要定期更换、消毒。

3)接种的试管、三角并瓶等应做好标记,注明培养基、菌种的名称、日期。移入接种室内的所有物品,均须在缓冲室用70%酒精擦试干净。

4)接种前,双手用70%酒精或新洁尔消毒,操作过程不离开酒精灯火焰;棉塞不乱放;接种工具使用前后均需火焰灭菌。

5)培养箱应经常清洁消毒。

接种室的消毒方法

1、紫外线灭菌接种室使用前打开紫外灯照射约30分钟,就能使空气和室壁表面基本上无菌。为了加强灭菌效果,在开灯以前可以在接种内喷洒石炭酸溶液,使空气中附有微生物的尘埃降落,并杀死一些微生物。接种室的台面等,可以用2-3%的来苏尔擦洗。紫外线对人体皮肤,尤其对眼睛具有杀伤力,因皮不要直视开着的紫外灯,也不能在开着灯的情况下工作。

2、喷洒石炭酸将石炭酸水浴,稍热,使之溶解。用吸耳球通过吸管吸取该溶液,配成5%溶液。对于小房间,可用喷雾器由上至下、由里至外顺序进行喷雾,并门,稍等片刻即可使用。石炭酸对皮肤有较强的毒害作用,使用时不要接触皮肤。

3、福尔马林熏蒸

1)用量:市售福尔马林是37-40%的甲醛水溶液。常用量按每立方空间2-6ml计算。

2)熏蒸方法:用福尔马林熏蒸有两种方法:

①加热熏蒸:按熏蒸空间计算,量取甲醛溶液,放在酒精灯上方的小铁筒或烧杯中,点燃酒精灯,关闭室门。酒精灯最好在甲醛蒸完后即自行熄灭。

②氧化熏蒸:在一瓷杯里铺一张报纸,放入高猛酸钾(其用量为1/2甲醛量),再取定量的甲醛溶液,倒在盛有高猛酸钾的容器里,立即关门。几秒钟后,由高猛酸钾氧化甲醛反应所产生的热将其余的甲醛蒸为气体。由于甲醛对人眼、鼻有强烈的刺激作用,熏蒸后相当时间内不能进入室内工作。因此,接种室至少在使用前24小时进行熏蒸,房间应密闭,保持12小时。之后可取与甲醛等更是的氨水,倒在一个瓷碗里,放入熏蒸过的接种室,以减少甲醛对人的刺激作用。用氨水中和,至少应在工作前2小时进行。

4、过滤除菌近几年来,多采用一种称之为超净工作台的接种室,其原理是借助于一鼓风机将普通空气鼓入,通过粗滤、超滤纤维过滤后,进入工作台内的空气即为无菌空气。整个工作室内要求清洁无尘,这样可延长超净工作台的使用寿命。新的超净工作台使用前,要进行无菌试验,确定合格方可使用,接种前,应先将工作台开启5-6分钟。 接种室无菌程度检查取无菌的营养琼脂平板,在接种室内台上和台下各放一套,把皿盖打开15min,然后盖好,倒置37℃恒温培养24-28小时,如果每个皿内菌落不超过4个,则可以认为无菌程度良好,若菌落很多,则应对接种室进一步灭菌。