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过滤完盐酸万古霉素后，微生物仍可正常生长---赛多利斯实验室

[2019/4/10]

过滤完盐酸万古霉素后，微生物仍可正常生长---赛多利斯实验室

开展以下试验是用于证明Sterisart®系统在过滤完盐酸万古霉素后，仍可以让微生物在其中正常生长。

试验背景

在没有抑制剂的情况下，微生物可以快速增殖。可能存在于无菌检测药品样品中的任何防腐剂或抗生素残留物都必须在培养基加入系统之前被冲洗去除。由于万古霉素不能被中和，所有与样品接触的部件必须为低吸附，且所采用的设计形式必须保证能够实现彻底冲洗从而去

除所有残留。

试验描述

Sterisart® 系统经无菌生理盐水润湿后，对盐酸万古霉素溶液进行过滤。在完成冲洗步骤之后，根据欧洲药典要求，将胰酪大豆胨液体培养基加入Sterisart® 系统的一个容器内。向这个容器内接种50-100CFU微生物，进行微生物培养，最多培养3天。取出另一个容器中的滤膜，进行抑制试验。

材料和设备

抗生素盐酸万古霉素

检测菌株

枯草芽孢杆菌

金黄色葡萄球菌

胰酪大豆胨液体培养基Oxoid;

NaCl

Merck

泵

Sterisart®通用型无菌检测泵，

Sterisart®通用型无菌检测泵

Sterisart® 装置

Sterisart® NF,

Sterisart® NF适配器

检测准备

v 无菌生理盐水

为制备0.9%的无菌生理盐水溶液，先将9g固体NaCl溶解于1L去离子水中，装入带有隔膜的瓶中，制备2L。然后对配制完成的溶液进行121°C、40分钟的高压蒸汽灭菌。

抗生素溶液的溶解(20 g/L)

2.1 背景

抗生素的溶解是无菌检测操作中非常关键的操作步骤。未溶解的残留抗生素会被膜过滤器截留，导致培养过程中抑制微生物生长。试验表明使用30°C的生理盐水溶解盐酸万古霉素最为迅速可靠。更为详细的试验描述和试验结果请参考Sterisart® 应用指南No.1。针对下一步骤，我们还专门开发了一种注入和摇匀的方法。生理盐水的预热可通过培养箱或水浴轻松实现

2.2 样品制备

取事先准备好一个带有隔膜的500ml瓶(瓶A)，内含10g抗生素混合物。将Sterisart® NF适配器16470的无标识管路插入泵中，然后将16470带有黄色标记的长针头插入瓶B的隔膜中，该瓶内装有500ml已预热至30°C的无菌生理盐水；进而将短针头插入装有抗生素的瓶A的隔膜中。瓶A以一定角度倒置，使

抗生素冻干粉落到瓶颈处。然后将NaCl溶液以设定值为300的泵速打入装有抗生素的瓶A中。

大约5秒钟后，将瓶A恢复正位，让抗生素和NaCl溶液一起回落到瓶底。流体的泵入压力要足以将粘在玻璃瓶壁上的抗生素冲洗下来。向瓶A注入溶液到500ml刻度，然后摇动瓶子直至抗生素完全溶解。以上操作步骤使用了货号为16470的Sterisart®NF适配器和货号为16413的Sterisart®通用型无菌检测泵，该泵是现有16420无菌检测泵的上一代产品。有关Sterisart® NF 适配器16470使用的详细信息见产品说明书。

试验方法

膜过滤

将Sterisart® 系统16466装入泵中后，向系统泵入100ml无菌生理盐水，用于润湿滤膜。然后向Sterisart® 系统中泵入无菌空气以排空溶液。随后，500ml溶解好的抗生素经容器滤过。需特别当心，避免抗生素液体沾到后续无法冲洗到的区域。再次用无菌空气排空装置。随后用5×200ml无菌生理盐水冲洗滤膜，以确保无抗生素残留在膜和塑料部件上，从而不会抑制微生物的生长。有关Sterisart®NF装置的详细使用信息见所附产品说明书。

注入培养基

将100ml大豆酪蛋白消化培养基注入Sterisart® 系统两个容器中的一个。用夹子将管路夹紧封好，在距夹子约10cm处切断管路。第二个容器用于进一步检测。(见 4.5).

接种微生物

盐酸万古霉素适用于多数革兰氏阴性细菌。因此试验使用枯草芽孢杆菌(革兰氏阴性菌)。通过系列稀释方式确保每ml枯草芽孢杆菌溶液中含50-100CFU菌。取1.0ml绿脓杆菌溶液加入胰酪大豆胨液体培养基中。

培养

Sterisart® 容器在30 °C条件下培养3天。每天检查微生物的生长情况。

膜的抑制试验

Sterisart® 系统第二个容器中的Sartochem®

膜是用来进行抑制试验的。打开装置，移出膜，将膜分成以下3部分：

a: 中央膜片

b: 外部膜片

c: 支撑片