中性粒细胞吞噬功能的测定操作方法

[2012/11/6]

　　中性粒细胞(Poly morpho nuclearleukocyte，PMN )的功能包括粘附、移动、吞噬杀菌等，是机体天然免疫力的重要组成部分。

　　试剂及材料

　　1.白色葡萄球菌

　　2.肉汤培养基

　　3.硷性美蓝液

　　操作方法

　　1.菌液的制备将白色葡萄球菌接种于中，放37℃温箱内培养12h左右;置水浴中加热100℃10min杀死细菌，用无菌生理盐水稀释成6×108细菌/ml备用;

　　2.用血红蛋白吸管吸取受试者耳垂或指血40μl，立即加入盛有20μl肝素(浓度为20U/ml)的洁净凹玻片的凹孔内，轻轻搅动混匀，再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混匀。然后置入铺有湿纱布的有盖容器内(此容器先放37℃温箱中预温)，在37℃温箱中作用30min，其间每隔10min摇匀一次;

　　3.作用完毕，取1小滴混合液置于洁净无油污的载玻片一端，推成薄片。待干后，用甲醇固定4～5min，硷性美蓝液染2～3min，置油镜下观察。随机计数100个中性粒细胞，分别记录发生吞噬和未吞噬的白细胞数，对有吞噬作用的白细胞，应同时记录所吞噬的细菌数;

　　结果分析

　　吞噬细胞%=即100个中性粒细胞中吞噬有细菌的细胞数;

　　吞噬指数=将100个中性粒细胞所吞噬的细菌总数除以100，得到每个白细胞吞噬细菌的平均数，即为吞噬指数。

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