培养方法：鼠肝细胞原代

[2012/11/7]

　　一、 实验材料：

　　6-8周龄大小鼠;剪刀，镊子，灌流用针头，连接管，玻璃平皿，细胞筛，冰盒

　　二、实验方法：

　　1. 培养用液

　　洗涤培养基：DMEM

　　基础培养基：DMEM/F12

　　2. 消化用液

　　前灌流液T1 ;后灌流液T2

　　3. 培养基本操作方法

　　a. 将小/大鼠进行麻醉，待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上，于超净台中解剖，暴露肝脏;

　　b. 沿肝门静脉插管固定，灌流前灌流液T1(37℃下预热)，流速5ml/min，待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min;

　　c. 前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2(37℃下预热)，流速3ml/min，5-10min;

　　d. 取下肝脏，置于平皿中，冰上剪碎肝组织，200目滤网过滤;用基础培养基清洗网上组织;

　　e. 收集滤液，600rpm 离心2min;重复一次;

　　f. 弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后，台盼蓝染色计数，将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中，37℃ 5%CO2培养箱中培养观察。
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